Taq-DNA-Ligase
| DNA-Ligase | ||
|---|---|---|
| Andere Namen | Polydesoxyribonukleotidsynthase [NAD(+)] | |
| Masse/Länge Primärstruktur | 674 Aminosäuren, 76.527 Da | |
| Bezeichner | ||
| Externe IDs | ||
| Enzymklassifikation | ||
| EC, Kategorie | 6.5.1.2 | |
Die Taq-DNA-Ligase ist ein Enzym aus der Gruppe der DNA-Ligasen und wird von Thermus aquaticus gebildet.
Eigenschaften
Die Taq-DNA-Ligase erzeugt je eine Phosphodiesterbindung zwischen zwei aneinandergrenzenden DNA-Sequenzen in DNA-Doppelsträngen und dient der Bakterie zur DNA-Replikation, Rekombination und zur DNA-Reparatur. Cofaktoren sind zweiwertige Magnesiumionen.
Die Taq-DNA-Ligase katalysiert die Reaktion:
NAD+ + (Desoxyribonukleotid)(n) + (Desoxyribonukleotid)(m) AMP + beta-Nicotinamid-D-ribonukleotid + (Desoxyribonukleotid)(n+m)
Anwendungen
Die Taq-DNA-Ligase wird im Zuge einer künstlichen Gensynthese zur mehrfachen, parallelen Ligation jeweils zweier DNA-Doppelstränge aneinander verwendet,[1] ist jedoch bei einer Verwendung der Gibson Assembly zur Klonierung nicht notwendig.[2] Die Taq-Ligase wird im Zuge einer PCR-Optimierung zur Erzeugung langer Produkte eingesetzt, jedoch unabhängig von der Ligase-Aktivität.[3] Weiterhin wird die Taq-DNA-Ligase zur Ligase-Kettenreaktion eingesetzt.[4]
Weblinks
Einzelnachweise
- ↑ D. G. Gibson: Enzymatic assembly of overlapping DNA fragments. In: Methods in enzymology. Band 498, 2011, S. 349–361, doi:10.1016/B978-0-12-385120-8.00015-2, PMID 21601685.
- ↑ R. M. Benoit, C. Ostermeier, M. Geiser, J. S. Li, H. Widmer, M. Auer: Seamless Insert-Plasmid Assembly at High Efficiency and Low Cost. In: PloS one. Band 11, Nummer 4, 2016, S. e0153158, doi:10.1371/journal.pone.0153158, PMID 27073895, PMC 4830597 (freier Volltext).
- ↑ K. B. Ignatov, V. M. Kramarov: DNA ligases from thermophilic bacteria enhance PCR amplification of long DNA sequences. In: Biochemistry. Biokhimiia. Band 74, Nummer 5, Mai 2009, S. 557–561, PMID 19538130.
- ↑ M. Wiedmann, W. J. Wilson, J. Czajka, J. Luo, F. Barany, C. A. Batt: Ligase chain reaction (LCR)–overview and applications. In: PCR methods and applications. Band 3, Nummer 4, Februar 1994, S. S51–S64, ISSN 1054-9803. PMID 8173509. (PDF).