Punktspreizfunktion

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Wie ein Bild in einem konfokalen Mikroskop gebildet wird: Das Bild entsteht durch Faltung (Mathematik) der echten Lichtquellen mit der Punktspreizfunktion
Vergleich von berechneten Punktspreizfunktionen bei normaler (Weitfeld-)Fluoreszenzmikroskopie, Zwei-Photonen-Mikroskopie und konfokaler Mikroskopie, oben in der Fokusebene und unten entlang der optischen Achse.

Die Punktantwort, Punktbildfunktion, Punktverteilungsfunktion, Punktbildverwaschungsfunktion oder Punktspreizfunktion (engl. „point spread function“, kurz PSF) beschreibt in der Hochfrequenztechnik, Optik und Bildverarbeitung die Wirkung von bandbegrenzenden Einflussfaktoren wie:

  • Beugungserscheinungen an Blenden
  • Abbildungsfehler
  • Einfluss der Sensorfläche bzw. Apertur

Sie gibt an, wie ein idealisiertes, punktförmiges Objekt durch ein System abgebildet würde. Oft ist die Form der Punktantwort unabhängig vom ursprünglichen Ort des idealen, punktförmigen Objekts. In diesem Fall spricht man von einem linearen System und die Gesamtantwort des Systems kann als Summe über die Punktantworten des in seine Punkte zerlegten Objektes berechnet werden.

In der Lichtmikroskopie kann die durch Beugung begrenzte, maximal erreichbare Auflösung eines Objektivs mit Hilfe der PSF bestimmt werden. Als Auflösung eines Mikroskops wird in der Regel der Abstand verstanden, den zwei punktförmige Strukturen haben müssen, damit sie als getrennte Strukturen (und nicht als eine Struktur) erkannt werden können. Während die Breite (FWHM) der Punktspreizfunktion den wichtigsten Faktor für die Auflösung darstellt, hängt die tatsächlich erreichte Auflösung eines mikroskopischen Bilds auch noch von anderen Faktoren wie dem Signal-Rausch-Verhältnis ab.

Bestimmung

Experimentelle Messung

Mikroskopisch aufgenommen wird jedoch meist nur das Bild einer kleinen kugelförmigen Struktur, also beispielsweise das mikroskopische Abbild von sehr kleinen fluoreszierenden Latexkügelchen[1]. Um ein Maß für die erreichbare Auflösung in der x-, y- oder z-Richtung zu bestimmen, wird zunächst die Helligkeitsverteilung entlang eines Profils durch den hellsten Punkt parallel zur gewünschten Achse bestimmt. Die Breite dieser Helligkeitsverteilung auf halber Höhe zwischen Intensitätsmaximum und Intensitätsminimum (FWHM Full Width Half Maximum, deutsch Halbwertsbreite) wird praktischerweise oft als erreichbare Auflösung angegeben.

Theoretische Berechnung

Alternativ kann die Punktspreizfunktion auch theoretisch für verschiedene experimentelle Abbildungsszenarien berechnet werden[2][3]. Die Punktspreizfunktion kann mithilfe von Beugungsintegralen berechnet werden[4].

Das Airy-Scheibchen ist die Punktspreizfunktion einer Blende, welche zum Beispiel auch die runde Einfassung einer Linse sein kann.

Siehe auch

Weblinks

Einzelnachweise

  1. Nasse M. J., Woehl J. C., Huant S.: High-resolution mapping of the three-dimensional point spread function in the near-focus region of a confocal microscope. In: Appl. Phys. Lett. 90. Jahrgang, Nr. 031106, 2007, S. 031106-1–3, doi:10.1063/1.2431764.
  2. B. Richards, E. Wolf: Electromagnetic diffraction in optical systems II. Structure of the image field in an aplanatic system. In: Proc. R. Soc. Lond. A. Vol. 253, 1959, S. 358–379, JSTOR:100740.
  3. Nasse M. J., Woehl J. C.: Realistic modeling of the illumination point spread function in confocal scanning optical microscopy. In: J. Opt. Soc. Am. A. 27. Jahrgang, Nr. 2, 2010, S. 295–302, doi:10.1364/JOSAA.27.000295.
  4. Progress in Optics. Elsevier, 2008, ISBN 978-0-08-055768-7, S. 355 (englisch, google.com).

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MultiPhotonExcitation-Fig7-doi10.1186slash1475-925X-5-36.JPEG
Autor/Urheber: Alberto Diaspro, Paolo Bianchini, Giuseppe Vicidomini, Mario Faretta, Paola Ramoino and Cesare Usai, Lizenz: CC BY 2.0
Original Abbildungslegende: Optische Antwort eines punktförmigen Emitters. Von links nach rechts: berechnete xy (oben) und rz (unten) Intensitätsverteilung in logarithmischer Skala für eine punktförmige Quelle aufgenommen in einem Weitfeld-, 2-Photonenanregungs- und Konfokal-Mikroskop. Sowohl die 2-Photonenanregungs, als auch die konfokalen Verteilungen zeigen ein besseres Signal-zu-Rausch-Verhältnis als im Fall des Weitfeldbildes. Das 2Photonenanregungsbild is weiter weil die benutzte Wellenlänge im Vergleich doppelt so groß ist. Diese Verteilungen sind auch als Punktspreizfunktionen ihrer Mikroskope bekannt. Optische Parameter: Anregungswellenlänger bei 488 nm für 1 Photonenanregung und 900 nm für 2 Photonenanregung; Emissionswellenlänge bei 520 nm und numerische Apertue 1.3 für ein Öl-Immersionsobjektiv mit einem angenommenen Brechungsindex für Öl bei 1.515.
Convolution Illustrated eng.png
Convolution illustrated: longitudinal (XZ) central slice of a 3D image acquired by a fluorescence microscope.