ONPG-Test
Der ONPG-Test (Abk. für o-Nitrophenyl-β-D-galactopyranosid-Test) ist ein biochemischer Nachweis für das Enzym β-Galactosidase. Die Hydrolyse des synthetischen Substrates o-Nitrophenyl-β-D-galactopyranosid (ONPG) durch eine β-Galactosidase wird in der mikrobiologischen Diagnostik eingesetzt um Bakterien, zum Beispiel aus der Gattung der Burkholderia, Salmonellen und Nocardien, anhand ihrer β-Galactosidase-Aktivität voneinander zu unterscheiden.[1][2]
Grundlagen
Einige Bakterien besitzen das Enzym β-Galactosidase, das es ihnen ermöglicht den Zweifachzucker Lactose zu verstoffwechseln. Beim ONPG-Test ersetzt das synthetische Galactosid o-Nitrophenyl-β-D-galactopyranosid das natürliche Substrat der β-Galactosidase. ONPG wird wie Lactose durch die Galactosid-Permease in die Zelle hineingebracht und durch die β-Galactosidase hydrolysiert. Hierbei entstehen die beiden Reaktionsprodukte Galactose und o. Letzteres verursacht eine gelbe Verfärbung der Testlösung bei positiven Proben.
Durchführung
Für jede Probe werden in ein steriles Röhrchen je eine ONPG-Scheibe und etwa 200 µl der sterilen Kochsalzlösung hinzugegeben, so dass sich die ONPG-Scheibe vollständig unter der sterilen Kochsalzlösung befindet. Anschließend werden etwa 1 bis 3 Kolonien des zu untersuchenden Bakteriums von einem festen Nährmedium (Agarplatte/Primärkultur) mit Hilfe eines sterilen Stabes in der sterilen Kochsalzlösung suspendiert. Das Röhrchen mit dem Ansatz inkubiert man dann bei 36 ± 1 °C für maximal 24 Stunden und beobachtet, ob sich eine Farbveränderung der Suspension einstellt.
Auswertung
Die Ablesung des Testes erfolgt nach etwa 1, 6 und ggf. 24 Stunden. Eine Gelbfärbung der physiologischen Kochsalzlösung zeigt einen positiven ONPG-Test an. Keime, die nach 6 Stunden keine positive Farbveränderung zeigen, sollten bis zu 24 Stunden weiter inkubiert werden. Bleibt die Gelbverfärbung aus, spricht dies für ein negatives Testergebnis.
| ONPG-positive Bakterien | ONPG-negative Bakterien |
|---|---|
| Burkholderia cepacia | Burkholderia stabilis |
| Burkholderia multivorans | |
| Burkholderia vietnamiensis | |
| Burkholderia gladioli |
Da der ONPG-Test zu falsch positiven Ergebnissen führen kann, wird bei der Diagnose von Staphylokokken gelegentlich alternativ ein Nachweis der β-Galactosidase mit X-Gal durchgeführt.[3]
Einzelnachweise
- ↑ R. De Ryck, M. J. Struelens, E. Serruys: Rapid biochemical screening for Salmonella, Shigella, Yersinia, and Aeromonas isolates from stool specimens. In: Journal of Clinical Microbiology. Band 32, Nummer 6, Juni 1994, S. 1583–1585, PMID 8077408. PMC 264043 (freier Volltext).
- ↑ M. Flores, E. G. Ford, J. M. Janda: Value of the O-nitrophenyl-beta-D-galactopyranoside test to differentiate among the aerobic actinomycetes. In: Journal of Clinical Microbiology. Band 28, Nummer 9, September 1990, S. 2142–2144,. PMID 2121796. PMC 268125 (freier Volltext).
- ↑ H. Tse, E. Chan, C. W. Lam, K. F. Leung, P. Chow, K. C. Lee, K. H. Sze, S. K. Cheung, M. K. Tse, P. L. Ho, S. P. Leung, S. K. Lau, P. C. Woo, K. Y. Yuen: Production of 2-aminophenoxazin-3-one by Staphylococcus aureus causes false-positive results in ?-galactosidase assays. In: Journal of Clinical Microbiology. Band 50, Nummer 11, November 2012, S. 3780–3782, doi:10.1128/JCM.02299-12. PMID 22972831. PMC 3486264 (freier Volltext).